沉淀形成并非偶然,而是多种因素共同作用的结果:
1、温度波动
血清在反复冻融或储存温度不稳定(如未严格保持在 - 20°C 或更低)时,蛋白质溶解度下降,极易析出。这就好比在炎热的夏天,原本溶解在水中的糖,当水温降低时,多余的糖就会结晶析出。
2、物理应力
剧烈摇晃、震荡或不当的移液操作(产生气泡)会破坏溶液中蛋白质的稳定状态,促使聚集。想象一下平静的湖面,当被外力剧烈搅动时,水面会泛起层层涟漪,甚至形成漩涡,血清中的蛋白质在物理应力的作用下也是如此。
3、时间因素
长期储存,尤其是不理想条件下,沉淀形成几率显著增加。就像存放时间过长的食物会变质一样,血清在不良储存环境下,随着时间的推移,其内部成分也会发生变化,导致沉淀的产生。
4、成分特性
血清本身富含易沉淀物质,如纤维蛋白原(凝血关键因子)、脂蛋白及矿物质离子。这些成分的存在,使得血清在特定条件下更容易出现沉淀现象。
患于未然
如何尽量避免沉淀出现?
预防胜于补救,为了减少血清沉淀的出现,我们可以采取以下措施:
① 温柔以待
解冻时置于 2-8°C 冰箱过夜(推荐),或室温水浴中轻柔摇晃加速(避免过热)。切忌暴力摇晃或高温速融。这就像对待一件珍贵的艺术品一样,需要小心翼翼,避免因粗暴的操作而损坏血清的品质。
② 分装大师
大包装血清解冻后立即分装成小份(如 50ml),标记日期,-20°C 以下冻存。避免反复冻融同一瓶血清。将大包装血清分装成小份,就像将一大块蛋糕切成小块,每次只取用所需的部分,既能保证血清的质量,又能避免浪费。
③ 冻融有道
每次只取出计划用量解冻,解冻后 4°C 保存并尽快使用(通常建议 2-4 周内)。合理的冻融计划可以确保血清在最佳状态下被使用,提高实验的成功率。
④ 静置为王
解冻后的血清如需暂时储存于 4°C,尽量减少不必要的晃动和移动。让血清在相对安静的环境中存放,有助于保持其稳定性。
⑤ 分步解冻
大体积血清可先在 4°C 部分解冻,吸取所需液体后,剩余部分立即放回 - 20°C。这种分步解冻的方法可以减少血清在液态下暴露的时间,降低沉淀产生的风险。
师兄支招:
甲:遇到过血清解冻后出现絮状沉淀,其实是纤维蛋白析出。后来改成逐步解冻(4℃过夜→室温复温),解冻时轻轻摇晃,沉淀明显减少;如果已经产生沉淀,用 3000rpm 离心 10 分钟,上清液可正常使用,不影响细胞培养。
乙:遇到血清沉淀,首先判断沉淀类型。若是纤维蛋白析出造成的絮状沉淀,可400 - 600g离心5 - 10分钟,取上清使用,不影响血清活性。若沉淀较多且性质不明,可将血清在37℃水浴短暂加热,使蛋白溶解,再轻柔混匀。注意避免剧烈摇晃,防止产生更多沉淀。同时,尽量采用2 - 8℃缓慢解冻血清,减少反复冻融,能从源头降低沉淀产生几率。