细胞接收与处理标准操作规程 (SOP)

细胞接收与处理标准操作规程 (SOP)

一、 细胞收货通用流程

1. 检查包装

   · 收到细胞后，立即检查外包装及培养瓶有无破损、漏液。

   · 如有任何异常，立即拍照记录（包装和显微镜下状态），并联系客服。

2. 显微镜下初步观察

   · 用酒精棉球彻底消毒培养瓶表面。

   · 无需打开瓶盖，直接在显微镜下观察细胞状态、密度并检查是否有微生物污染（如细菌、真菌）。

   · 拍照记录不同倍数下的细胞形态和是否有污染，作为售后凭证。

3. 稳定细胞状态

   · 将整个培养瓶（瓶盖拧紧）放入37°C、5% CO₂培养箱中，静置2-3小时，让细胞从运输应激中恢复。

4. 处理决策

   · 静置后，参照附带的细胞操作指南，根据细胞密度和状态进行首次传代或冻存。

   · 随货资料：请核对并妥善保管细胞说明书、培养操作指南、细胞鉴定报告及支原体检测报告。

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二、 常温细胞收货当天处理细则

第一步：收货与检查

· 执行第一部分（通用流程） 的第1、2步。

第二步：更换培养基与细胞收集

· 消毒瓶身后，在超净工作台中打开瓶盖。

· 更换为随货赠送的完全培养基。

· 特别注意：如果显微镜下发现有较多细胞悬浮，需将瓶内所有培养基转移至无菌离心管，离心（如1200rpm, 5min）收集细胞，弃去旧培养基。

· 完成更换或收集后，将培养瓶放入培养箱继续静置2-3小时。

第三步：静置后处理（根据细胞密度）

三、 细胞传代操作步骤

A. 贴壁细胞传代

1. 准备：吸弃旧培养基。

2. 冲洗：沿培养瓶侧壁缓慢加入PBS等冲洗液，轻轻晃动后吸弃，去除残留血清。

3. 消化：加入预热的胰酶（如T25加1ml），轻轻晃动使胰酶覆盖所有细胞。

4. 孵育：室温消化约2分钟（时间因细胞而异）。

5. 观察：在显微镜下观察，直至≥90% 细胞变圆、脱落。若未达到，可每30秒检查一次。

6. 终止：当细胞充分解离后，立即加入两倍胰酶体积的预热的完全培养基终止消化。

7. 吹打：用移液器轻轻吹打瓶壁，使细胞完全脱落并分散成单细胞悬液。

8. 离心：将细胞悬液转移至离心管，200 × g 离心 3-5分钟，弃上清。

9. 重悬与接种：用少量新鲜完全培养基重悬细胞沉淀，按适当比例稀释后，接种到新的培养瓶中。

10. 培养：放入培养箱。若使用普通瓶盖，务必旋松瓶盖以利气体交换。

B. 悬浮细胞传代

1. 收集与离心：将细胞悬液全部转移至离心管，1000 rpm 离心 5分钟，弃上清。

2. 重悬：加入1-2ml新鲜完全培养基，轻柔重悬细胞。

3. 接种：按1:2的比例将细胞悬液传至新T25培养瓶，并补充总培养基量至5-8ml。

4. 培养：放入培养箱继续培养。

四、 特殊问题处理：运输中脱落的贴壁细胞

部分贴壁不牢的细胞在运输中会脱落，属正常现象，按以下步骤处理：

1. 收集：将瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心（1200rpm, 3-5min）弃上清。

2. 清洗：用PBS重悬细胞，再次离心（1200rpm, 3-5min）弃去PBS。

3. 消化：加入约1ml 0.25%胰酶，轻柔混匀（勿剧烈吹打），放入培养箱消化1-2分钟。

4. 终止与分散：取出后轻轻吹打使细胞团分散，迅速加入3-5ml完全培养基终止消化，离心（1200rpm, 3-5min）弃上清。

5. 重悬与接种：加入5ml完全培养基重悬，按比例接种到新培养瓶/皿中。

6. 观察：镜下观察。若细胞为单颗或仅有3-5个细胞的小团，可正常培养，待其贴壁生长。

五、 售后服务政策摘要

重要提示：任何异常问题，第一时间拍照并与我们联系是获得售后支持的关键。