细胞培养|常温细胞收货当天应该怎么处理？

常温细胞收货当天应该怎么处理？

1. 收到常温细胞后，请立即拍照记录包装是否完好、有无漏液或瓶身破损。

2. 在显微镜下观察细胞是否存在微生物污染，并拍摄不同倍数下的细胞状态及染菌情况，以便后续售后处理。

3. 消毒瓶身后，更换为赠送的完全培养基，随后放入培养箱静置2–3小时。如发现较多细胞悬浮，需离心收集并重新接种至培养瓶。

4. 观察细胞密度：

   · 若密度超过80%，可进行正常传代处理（部分原代细胞不可传代，请根据实际情况判断）。首次传代推荐比例为1:2至1:3（具体比例视实际细胞密度而定，如不确定请联系技术支持）。

   · 若密度未达80%，可继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞需离心全部培养基以收集细胞。

5. 如因气温或运输等原因导致贴壁细胞漂浮，请离心收集细胞后，在离心管中进行消化传代（参考附件），或及时联系技术支持获取指导。

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贴壁细胞传代步骤

1. 吸弃原有细胞培养基。

2. 沿贴壁细胞层对侧加入冲洗液，避免扰动细胞层，轻轻摇晃容器数次。

3. 吸弃冲洗液，加入预热的胰酶（例如T25培养瓶加入1ml），确保胰酶覆盖细胞层。

4. 室温孵育约2分钟（具体时间因细胞系而异）。

5. 显微镜下观察细胞解离情况，若未达90%可适当延长孵育时间，每30秒检查一次。

6. 当细胞解离程度≥90%时，倾斜容器使液体流尽，加入两倍体积预热的完全培养基，吹打细胞层表面使细胞分散。

7. 将细胞转移至15mL无菌离心管，以200×g离心3–5分钟（具体参数视细胞种类调整）。

8. 用少量预热完全培养基重悬细胞沉淀，按推荐比例稀释后接种至新培养容器，并放入培养箱。如使用普通培养瓶，需旋松瓶盖以保证气体交换（透气瓶盖除外）。

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悬浮细胞传代步骤

1. 收集T25培养瓶中的细胞悬液至离心管，1000rpm离心5分钟。

2. 弃上清，加入1–2ml完全培养基重悬细胞。

3. 按1:2比例传代至新T25培养瓶，并补充5–8ml新鲜完全培养基。

4. 将培养瓶放入细胞培养箱继续培养。